产品货号:
BTN13-34410
中文名称:
水泡性口炎病毒印第安纳型RT-PCR试剂盒
英文名称:
Vesicular Stomatitis Virus Indiana Serotype(VSV-IND)RT-PCR Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品时基于RT-PCR技术开发的专门用于水泡性口炎病毒印第安纳型研究检测的试剂盒。
水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)为弹状病毒科,水疱病毒属成员。其病毒粒子为子弹状或圆柱状,长度约为直径的3倍。基因组为不分节段的单股负链RNA(ssRNA),长约11kb。根据中和试验和补体结合试验,可将该病毒分为2个血清型,分别为印第安纳型和新泽西型。VSV能感染多种动物和昆虫,以及马、牛、羊、猪等家畜。因此灵敏快捷地检测水泡性口炎病毒印第安纳型具有重要的意义。
- 即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
- 产品经过精心优化,分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
- 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
- 特异性高,引物是根据水泡性口炎病毒印第安纳型RNA高度保守区设计,只能检测水泡性口炎病毒印第安纳型,不会跟除此之外的其他生物的RNA发生交叉反应。
- 本制品足够50次20μL体系的RT-PCR反应。
- 本制品只能用于定性实验,不能用于定量实验。
- 本制品只能用于科研。
组分 | 规格 |
2×RT-PCR Buffer | 500μL |
10×RT-PCR酶混合液 | 50μL |
超纯水 | 1mL |
水泡性口炎病毒印第安纳型RT-PCR引物混合液 | 100μL |
水泡性口炎病毒印第安纳型 RT-PCR阳性对照(1×104拷贝/μL) | 250μL |
保存:-20℃,有效期一年。
为避免扩散传染性病原,本制品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA片段作为阳性对照的需要单独定制。
一、样品RNA的制备
- 如果有N个样品,必须设置N+2个提取反应,多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL试剂盒提供的RT-PCR阳性对照(1×104拷贝/μL)再加上一定量的水作为制备的阳性对照,加水后其总体积跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样。可以用水作为制备的阴性对照。
- 用自选方法纯化上述N+2个样品的RNA。本试剂盒跟市场上大多数样品RNA提取试剂盒兼容,也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。
二、设置RT-PCR反应
- 标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的RNA样品,额外增加的两个管一个用于RT-PCR阳性对照,另一个用于RT-PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分:
成分 N+2个
样品管RT-PCR
阴性对照RT-PCR
阳性对照2×RT-PCR Buffer 各10μL 10μL 10μL 10×RT-PCR酶混合液 1μL 1μL 1μL 水泡性口炎病毒印第安纳型RT-PCR引物混合液 各2μL 2μL 2μL 制备的N+2个RNA样品 各7μL 不加 不加 超纯水 不加 7μL 不加 水泡性口炎病毒印第安纳型
RT-PCR阳性对照(1×104拷贝/μL)不加 不加 7μL - 上机进行RT-PCR,RT-PCR反应参数:
过程 温度 时间 逆转录 42℃ 55分钟 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(30个循环)95℃ 15秒 55℃ 60秒 65℃ 60秒 终延伸 72℃ 10分钟
三、电泳分析
- 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳,检测扩增效果,由于扩增产物较短,建议用1.5%~2.0%的琼脂糖凝胶。
- 阳性样品预期得到的扩增产物长度为110bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或RT-PCR阴性对照)有此扩增产物,说明环境污染,则整个实验无效,不需要分析实验结果。
- 如果所有样品和RT-PCR阳性对照均无此扩增产物,则说明有系统性的问题(试剂,设备,程序,操作等),需要重复并排查原因。
- 如果没有上述两种情况,则实验有效,可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性,无则判定为阴性。
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